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干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室平面布局規(guī)劃設(shè)計(jì)
干細(xì)胞是一類具有自我復(fù)制能力的多潛能細(xì)胞,培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌室保證培養(yǎng)細(xì)胞生存是建設(shè)干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的重要條件。博泰小編帶大家了解干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室平面布局規(guī)劃設(shè)計(jì)要求有哪些。
一、干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室平面布局原則
干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室布局應(yīng)符合人、物分流,潔、污分流的原則,整個(gè)實(shí)驗(yàn)室分為潔凈區(qū)和非潔凈區(qū)。潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)之間人流通過更衣緩沖系統(tǒng)進(jìn)入,物流通過傳遞窗傳遞。
二、干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的人流物流
1、人流:實(shí)驗(yàn)室人員通過更衣緩沖進(jìn)入核心實(shí)驗(yàn)區(qū),做完實(shí)驗(yàn)之后通過退更緩沖退出實(shí)驗(yàn)室。若實(shí)驗(yàn)室設(shè)置陽性細(xì)胞制備間,應(yīng)設(shè)置獨(dú)立退出通道。
2、物流:干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室物品流分為樣本流、潔凈物品流、污物流。樣本在樣本接收間通過傳遞窗進(jìn)入實(shí)驗(yàn)區(qū)后,在樣本處理間進(jìn)行樣本前處理。
三、干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室平面布局
1、潔凈區(qū)
(1)更衣緩沖:更衣緩沖區(qū)通常按照緩沖、一更、二更、緩沖的流程布置。與外走廊連接的緩沖間為非潔凈區(qū),實(shí)驗(yàn)人員通過一更、二更、緩沖之后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室潔凈走廊。
(2)細(xì)胞制備:細(xì)胞制備區(qū)是整個(gè)干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的核心區(qū)域,其功能包括但不限于細(xì)胞的富集、分離純化、擴(kuò)增、凍存、功能性細(xì)胞定向分化等。
(3)培養(yǎng):干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞培養(yǎng)可在細(xì)胞制備間進(jìn)行,可在潔凈區(qū)設(shè)置單獨(dú)的細(xì)胞培養(yǎng)間,放置若干臺(tái)培養(yǎng)箱,不同批次的干細(xì)胞不應(yīng)同時(shí)在同一個(gè)培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
(4)制劑:制劑室也叫配液室,用于干細(xì)胞制劑的配制和灌裝或分裝等操作。制劑室的實(shí)驗(yàn)設(shè)備包括潔凈工作臺(tái)/生物安全柜、4℃醫(yī)用冰箱等。
(5)微生物檢測(cè):微生物檢測(cè)區(qū)的平面布局按照微生物實(shí)驗(yàn)室的要求設(shè)計(jì),包含準(zhǔn)備間、無菌室、陽性對(duì)照室及儲(chǔ)存室、洗消室等配套設(shè)施。
(6)細(xì)胞研發(fā)實(shí)驗(yàn)室:該區(qū)域根據(jù)客戶要求設(shè)置,用于細(xì)胞治療產(chǎn)品的研發(fā)、質(zhì)檢。
2、非潔凈區(qū)
(1)樣本接收區(qū):樣本接收區(qū)宜臨近電梯,方便送樣人員送樣。
(2)物料存放區(qū):存放實(shí)驗(yàn)所需的物品,如耗材、培養(yǎng)基、試劑等。
(3)輔助功能間:清洗滅菌室、污物暫存室、氣瓶間、數(shù)據(jù)中心、檔案室、辦公室等。
(4)細(xì)胞儲(chǔ)存區(qū):細(xì)胞儲(chǔ)存區(qū)需放置若干個(gè)液氮儲(chǔ)存罐、超低溫冰箱,需要較大空間。
(5)質(zhì)量檢測(cè)區(qū):質(zhì)檢區(qū)設(shè)置免疫檢測(cè)區(qū)、細(xì)胞生物學(xué)檢測(cè)區(qū)、理化檢測(cè)區(qū),可用于樣本檢測(cè)和細(xì)胞成品的質(zhì)量檢測(cè)。
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細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室規(guī)劃設(shè)計(jì)
實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)
細(xì)胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術(shù),要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)原則一般是無菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動(dòng)的內(nèi)側(cè),常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室,而洗刷消毒在另一室。
常用設(shè)施及設(shè)備
(1)超凈工作臺(tái):也稱凈化工作臺(tái),分為側(cè)流式,直流式和外流式三大類。
(2)無菌操作間:一般由更衣間,緩沖間和操作間三部分組成。操作間放置凈化工作臺(tái)及二氧化碳培養(yǎng)箱,離心機(jī),倒置顯微鏡等。緩沖間可放置電冰箱,冷藏器及消毒好的無菌物品等。
(3)操作間:普通培養(yǎng)箱,離心機(jī),水浴鍋,定時(shí)鐘,普通天平及日常分析處理物。
(4)洗刷消毒間:烤箱,消毒鍋,蒸餾水處理器及酸缸等。
(5)分析間:顯微鏡,計(jì)算機(jī)及打印機(jī)等。
培養(yǎng)器皿
常用細(xì)胞培養(yǎng)器皿有培養(yǎng)瓶,培養(yǎng)板,培養(yǎng)皿等。常準(zhǔn)備量是使用量的三倍,器皿應(yīng)選擇透明度好,無毒,利于細(xì)胞粘附和生長的材料,常用一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品。常用的器皿有下面幾種:
(1)液體儲(chǔ)存瓶:用于儲(chǔ)存各種配制好的培養(yǎng)液,血清等液體,常用規(guī)格有500ml,250ml, 100ml等幾種.
(2)培養(yǎng)瓶:根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞種類要求不同培養(yǎng)瓶的形態(tài)各異,用于細(xì)胞傳代培養(yǎng)的細(xì)胞要求瓶壁厚簿均勻,便于細(xì)胞貼壁生長和觀察,瓶口要大小一致,口徑一般不小于1cm,允許吸管伸入瓶內(nèi)任何部位,規(guī)格有200ml,100ml,50ml,25ml,10ml等幾種。
(3)培養(yǎng)皿:用于開放式培養(yǎng)及其它用途,分直徑30mm,60mm,120mm等幾種。
(4)吸管:常用的有長吸管和短吸管兩類,長吸管也稱刻度吸管。其改良后管上部有球型刻度稱改良吸管,刻度吸管用于移動(dòng)液體。常用1ml和10ml兩種,短吸管也叫滴管,分彎頭和直頭兩種。
(5)離心管:離心管是細(xì)胞培養(yǎng)中使用廣泛的器皿,根據(jù)用途不同形態(tài)各樣,常用于細(xì)胞培養(yǎng)的離心管有大腹式尖底離心管和普通尖底離心管兩類.前者分別為50ml,30ml,15ml;后者則多為10ml和5ml。
(6)其它:如三角燒瓶,燒杯,量筒,漏斗,注射器等。
細(xì)胞培養(yǎng)溫度
維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長,必須有恒定而適宜的溫度。不同種類的細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)溫度要求也不同。
人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5℃±0.5℃,偏離這一溫度范圍,細(xì)胞的正常代謝會(huì)受到影響,甚至死亡。
培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)低溫的耐受力較對(duì)高溫強(qiáng),溫度上升不超過39℃時(shí),細(xì)胞代謝與溫度成正比;人體細(xì)胞在39-40℃1小時(shí),即能受到一定損傷,但仍有可能恢復(fù);在40-41℃1小時(shí),細(xì)胞會(huì)普遍受到損傷,僅小半數(shù)有可能恢復(fù);41-42℃1小時(shí),細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷,大部分細(xì)胞死亡,個(gè)別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能;當(dāng)溫度在43℃以上1小時(shí),細(xì)胞全部死亡。
相反,溫度不低于0℃時(shí),對(duì)細(xì)胞代謝雖有影響,,但并無傷害作用;把細(xì)胞放入25-35℃時(shí),細(xì)胞仍能生存和生長,但速度減慢;放在4℃數(shù)小時(shí)后,再回到37℃培養(yǎng),細(xì)胞仍能繼續(xù)生長。
細(xì)胞代謝隨溫度降低而減慢。當(dāng)溫度降至冰點(diǎn)以下時(shí),細(xì)胞可因胞質(zhì)結(jié)冰受損而死亡。但是,如果向培養(yǎng)液中加入一定量的冷凍保護(hù)劑(二甲亞砜或甘油),可在深低溫下如-80℃或-196℃(液氮)長期保存。
合適的氣體環(huán)境
氣體是哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之一,所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。
氧氣參與三羧酸循環(huán),產(chǎn)生供給細(xì)胞生長增殖的能量和合成細(xì)胞生長所需用的各種成分。
開放培養(yǎng)時(shí)一般把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。二氧化碳既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物,也是細(xì)胞生長繁殖所需成分,它在細(xì)胞培養(yǎng)中的主要作用在于維持培養(yǎng)基的pH值。
大多數(shù)細(xì)胞的適宜pH為7.2-7.4,偏離這一范圍對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)將產(chǎn)生有害的影響。但細(xì)胞耐酸性比耐堿性大一些,在偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長。但有一些細(xì)胞也喜歡偏堿環(huán)境中生長,如成纖維細(xì)胞適合pH是7.4-7.6。每種細(xì)胞都有其適pH值。
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